细胞不知道该如何培养？这里为您整理了细胞培养时的一些常见小问题。

01新买的细胞如何处理？

细胞运输到手，应该先检查瓶子是否破裂；培养基是否漏出，是否浑浊；是否有支原体污染；迅速扩增冻存。并仔细阅读细胞说明书和注意事项。

02能否使用与原先培养条件不同的培养基？

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

如需自行配置培养基，请按照细胞说明书进行操作；推荐使用中乔随细胞附赠的100ml完全培养基。

03如何选用特殊细胞系培养基？

培养某一类型细胞没有固定的培养条件，在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同样很容易生长。

中乔为在库的近千种细胞都提供了“量身定制”的完全培养基。如您要购买HK-2 或MCF 10A细胞，建议与我们的HK-2细胞专用培养基（货号：ZQ-1317）、乳腺上皮细胞专用培养基（货号：ZQ-1311）一同购买。

04细胞培养基的配制和储存应该注意什么？

细胞培养基配好后，要先抽取少许放入培养瓶内在37℃培养箱内放置24~48h，已检测培养液是否有污染，然后方可用于实验。配置培养基所需的血清要合格并且保持稳定。一个批号试用效果良好后，就可一次购入较多同一批号的血清，这样实验条件稳定，配液时调整pH值较容易。每次配液量以使用两周左右的量为宜，一次配液不要太多，一是短期内用不完造成营养成分损失需要补充，二是量大易造成污染。

05购买的细胞死亡或存活率不佳可能原因？

常见原因可能有：

1）培养基使用错误或培养基品质不佳；

2）血清使用错误或血清的品质不佳；

3）解冻过程错误；

4）冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心；

5）悬浮细胞误认为死细胞；

6）培养温度使用错误；

7）培养箱气体浓度达不到要求；

8）细胞置于 –80 ℃ 太久。

06何时更换培养基？

视细胞生长密度而定，或遵照细胞说明书上的信息，按时更换培养基即可。

07细胞传代的方法都有哪些？

根据不同的细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打。

08原代细胞培养的首次传代应该注意什么？

细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前，不要急于传代；原代培养时细胞多为混杂生长，不同的细胞有不同的消化时间，因此要根据需要注意观察及时处理，并根据不同细胞对胰蛋白酶的耐受时间而分离和纯化所需要的细胞。

吹打细胞时动作要轻巧尽可能减少对细胞的损伤；首次传代时细胞接种数量要多一些，使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增值；随消化分离而脱落的组织块也可一并传入新的培养瓶。

09细胞冻存管应如何解冻？

将冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，可佩戴防护眼镜和手套预防冷冻管的爆裂。取出冷冻管后，须立即放入 37 ℃ 水浴环境中快速解冻，轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损害。并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。

10细胞冻存管解冻培养时，是否应马上去除 DMSO？

现在大多数实验室会在解冻细胞后加培养液将DMSO除去，但也有研究者认为除少数特别注明对 DMSO 敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，可直接放入含有 10~15 ml 新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除 DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。

11冷冻保存细胞的方法？

冷冻保存方法一：冷冻管置于 4 ℃ 30~60 分钟 →-20 ℃ 30 分钟 → -80 ℃ 16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽 vapor phase 长期储存。

冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降 1~3 ℃ 至 –80 ℃ 以下， 再放入液氮槽 vapor phase 长期储存。–20 ℃ 不可超过 1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入 –80 ℃ 冰箱中，存活率稍微降低一些。

12冷冻培养基为什么要加DMSO？

因为细胞在不加任何保护剂的情况下直接冻存时，细胞内外的水分都会很快形成冰晶，冰晶的形成将造成细胞损伤，还可引起细胞的的死亡。目前多采用甘油和DMSO做保护剂。这两种无明显细胞毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高包膜对水的通透性。

13细胞冻存太多会不会浪费？

每一种细胞系都应有充足的冻存储备，防止由于细胞污染等因素造成的细胞系的绝种，而且每一批次培养的细胞状态都不同，应该挑选几个状态较好的批次冻存保种。另外二倍体细胞等有限细胞系如果暂时不用zui好冻存以免传代太多，造成细胞衰老或者发生改变。

14如何应对常见的细胞污染？

1）细菌污染：

细菌是一种原核细胞微生物，其大小以微米(μm)计。常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。

遇到细菌污染，基本原则是马上扔掉细胞，不要扩大污染。如果你的细胞真的十分宝贵，先用带有双抗的PBS反复冲洗几遍，然后再培养液中加入硫酸庆大霉素、新霉素（50ug/ml）等，培养3天后换成带有双抗的培养液培养。

2）真菌污染：

是细胞培养过程中zui常见的一种，尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。污染培养细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。

建议预防为主，在培养箱的水中加入硫酸铜。

3）支原体污染：

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(zui小直径0．2um)并独立生活的微生物，支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。

支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊。多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落。